S-kortisol, Kortisolkoncentrationen i plasma varierar under dygnet, med högst koncentration tidig morgon och lägst koncentration omkring midnatt. I plasma transporteras kortisol bundet till kortisolbindande globulin (CBG) och albumin. Vanligen är bara några procent av den totala kortisolmängden fri och aktiv. Östrogener ökar koncentrationen av CBG i plasma och därmed ökar även den totala kortisolkoncentrationen.
Lågt kortisol vid ostressat morgonprov ger starkt stöd för diagnosen binjurebarkssvikt. Låga värden ses vid systematisk behandling med höga doser syntetiska glukokortikoider, såvida dessa inte korsreagerar med analysantikropparna.
Förhöjda värden förekommer vid Cushing-syndrom, men mätvärden inom referensintervallen utesluter inte diagnosen. Förhöjda värden förekommer även vid systemisk behandling med hydrokortison (kortisol) och kortison, vid graviditet och behandling med östrogen (inklusive östrogeninnehållande p-piller), samt vid all form av akut stress.
Störd dygnsrytm, till exempel sömnstörningar, skiftarbete, jet-lag eller nattligt datorspelande medför svårigheter att tolka morgonprov.